Cysteine proteases: potential serodiagnostic reagents for human Schistosomiasis and Fasciolosis
Notice bibliographique
Résumé
Schistosomiasis and fasciolosis are parasitic diseases that affect a great number of people, particularly in developing countries, and cause huge global morbidity. Diagnosis is essential for control, treatment and prognosis of the diseases and yet a simple, cheap, sensitive and specific assay is not readily available for either of them. In the current study, cathepsin B (SmCB) and cathepsin L1 (FhCL1) were investigated as potential diagnostic reagents to detect schistosomiasis and fasciolosis, respectively, in humans. The genes encoding SmCB and FhCL1 were expressed Pichia pastoris and the proteins isolated to homogeneity by affinity chromatography. The SmCB ELISA was optimized for antigen concentration, primary antibody dilution and secondary antibody dilution using a pool of sera obtained from patients that were coprologically-positive or negative for schistosomiasis. A clear distinctive was achieved between these two sera pools. However, when employed to screen a panel of patients from Senegal the test failed to provide satisfactory discrimination between schistosoma-infected and schistosoma-negative individuals. The FhCL1 ELISA was optimized using sera from Fasciola-infected individuals from Cuba, and samples from Cuban and Canadian non-infected patients. We determined the optimal dilution for the primary antibody and also assessed/compared the performance of anti-total IgG, IgG4, IgG1 and IgG2 secondary conjugated antibodies. Total IgG provided the best discrimination between Fasciola- infected and non-Fasciola infected individuals with a 99.99% sensitivity and specificity. Furthermore, by screening sera obtained from patients infected with various worm and protozoan diseases we showed that the FhCL1 ELISA does not cross-react with other diseases commonly found in similar geographical regions as fasciolosis. In conclusion, diagnosis of human schistosomiasis still remains uncertain and more studies need to be performed to improve our diagnostic test using SmCB. On the other hand, we have developed a simple, sensitive, specific and accurate test to detected human fasciolosis by using FhCL1, a major protease released by the parasite. The P. pastoris expression system allowed us to obtain up to 80 mg of FhCL1 enzyme per 4 L culture. Therefore, we not only have developed a standardized test that showed high specificity and sensitivity but we also have the methodology to obtain sufficent quantities of antigen needed future mass screening of human fasciolosis in affected regions.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».