Standard fluorescent proteins as dual-modality probes for correlative experiments in an integrated light and electron microscope
Notice bibliographique
Résumé
Integrated light and electron microscopes (ILEMs) will enable a new generation of high-precision correlative imaging experiments. To fully exploit these systems, samples must contain dual-modality probes that highlight the position of macromolecules in the context of cell ultrastructure. We demonstrate that the fluorescent proteins (FPs) GFP (green), YFP (yellow) and mCherry can be used as dual-modality probes for ILEM when preserved using the in-resin fluorescence (IRF) technique, which delivers stable active fluorophores in lightly stained, resin-embedded cells and tissues. However, we found that vacuum pressure in the ILEM affects the photophysics of FPs in IRF sections. Here, we show that reducing the vacuum pressure reduces fluorescence intensity of GFP and YFP, which is a consequence of water extraction from the sample and is reversible on re-creation of partial pressure with water vapour (but not oxygen or nitrogen gas). We also find that, although fluorescence intensity is reduced at a partial pressure of 200 Pa (created using water vapour), the FP intensity is remarkably stable over time in vacuum and resistant to photobleaching during imaging. We are thus able to define imaging strategies for standard FPs acting as dual-modality probes in a single ‘multi-colour’ integrated microscope system.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».