Détection des virus respiratoires et entériques en milieu hospitalier : une étude pilote

Selon l’Institut national de santé publique du Québec (INSPQ), les infections nosocomiales constituent une cause majeure de complication des soins de santé avec comme impacts, une augmentation de la mortalité et de la morbidité, une prolongation de l’hospitalisation et une majoration importante des coûts de santé. Ces infections représentent la quatrième cause de mortalité au Canada et sont à l’origine d’un grand nombre de lésions professionnelles (Raka et coll. 2006). Bien que des efforts considérables soient faits sur le terrain pour endiguer ce problème, les infections nosocomiales perdurent et tendent à se complexifier : résistance aux antibiotiques, souches plus virulentes, etc. Le risque encouru par le personnel travaillant dans les milieux de soins doit donc être revu et redéfini sur les bases des nouvelles approches moléculaires d'analyse des bioaérosols. Peu d’investigations sérieuses sur ce vecteur ont été réalisées (Beggs, 2003; Tellier, 2009; Lindsley et coll. 2010). Pourtant, le personnel travaillant dans les milieux de soins est en contact fréquent avec des agents biologiques infectieux présents dans l’air et l’environnement. Cette activité exploratoire avait pour but de valider, dans un premier temps, la mise en place de méthodologies afin de mieux détecter la présence de virus dans les milieux de soins et, dans un second temps, d'évaluer si ces méthodologies ainsi que les données préliminaires obtenues peuvent être appliquées dans une étude de plus grande envergure portant sur cette thématique de recherche. Deux techniques d’échantillonnage de l’air différentes furent utilisées sur le terrain en faisant appel d’une part, à un échantillonneur expérimental, le NIOSH 251, et d’autre part, au Coriolisµ® de Bertin Technologies. À la suite du traitement des échantillons visant à les concentrer, l’acide ribonucléique (ARN) a été extrait. Les cibles spécifiques telles l’Influenza A et B, ainsi que les Norovirus G1 et G2 furent détectées par réaction en chaîne par polymérase en temps réel (PCR quantitative en temps réel). Afin d’évaluer la résistance des Norovirus à l’aérosolisation, nous avons utilisé un modèle de culture cellulaire et de Norovirus murin. Des aérosols ont été générés dans une chambre environnementale, pour être ensuite échantillonnés. La charge virale totale des échantillons fut évaluée par PCR quantitative en temps réel et la viabilité des virus par culture cellulaire. En ce qui concerne les virus Influenza, il a été possible de détecter leur présence dans l’air de salles d’urgence à l’aide d’échantillonnages sentinelles. Ces derniers furent aussi détectés dans une chambre de patient ainsi que dans le couloir adjacent. Nous avons aussi détecté le Norovirus dans l’air de plusieurs chambres de patients (hôpital et centre d’hébergement et de soins de longue durée [CHSLD]), dans les corridors adjacents, au poste d’infirmière ainsi que sur des surfaces, suggérant ainsi une exposition professionnelle sous-estimée et non documentée. Concernant les essais en chambre environnementale, nous avons démontré qu’il est possible de récolter des particules virales infectieuses à l’aide d’échantillonneurs d’air, suggérant la résistance du Norovirus au stress d’aérosolisation. AbstractAccording to the Institut national de santé publique du Québec (INSPQ), nosocomial infections are a leading cause of healthcare complications, with impacts that include increased mortality and morbidity, prolonged hospitalization and a sharp spike in healthcare costs. These infections are the fourth cause of mortality in Canada and account for many occupational injuries (Raka and coll. 2006). Although considerable effort has been made in the field to contain this problem, nosocomial infections continue to exist and are becoming more complex: antibiotic resistance, more virulent strains, etc. The risk incurred by staff working in healthcare settings must be reviewed and redefined on the basis of new molecular approaches to bioaerosol analysis. There have been few serious investigations of this vector (Beggs, 2003; Tellier, 2009; Lindsley and coll. 2010). Nonetheless, healthcare staff are in frequent contact with infectious biological agents in the air and the environment. The purpose of this exploratory project was, first, to validate the implementation of methodologies for better detection of viruses in healthcare settings and, secondly, to assess whether these methodologies and the preliminary data obtained can be applied to a larger-scale study on this research theme. Two different air sampling techniques were applied in the field, one using an experimental sampler, NIOSH 251, and the other Coriolisµ® manufactured by Bertin Technologies. After the samples were treated to concentrate them, ribonucleic acid (RNA) was extracted. Specific targets such as influenza A and B, as well as norovirus G1 and G2 were detected through real-time polymerase chain reaction (real-time quantitative PCR). To assess norovirus resistance to aerosolization, we used a cell culture and murine norovirus model. Aerosols were generated in an environmental chamber and then sampled. The total viral load of the samples was evaluated through real-time quantitative PCR and the viability of the viruses through cell culture. The influenza viruses were able to be detected in emergency room air using sentinel samplings. These viruses were also detected in a patient room and the adjacent corridor. We also detected norovirus in the air of several patient rooms (hospital and long-term care facility [CHSLD]), in the adjacent corridors, at the nurses’ station and on surfaces, suggesting underestimated and undocumented occupational exposure. In the environmental chamber tests, we showed that infectious viral particles could be collected with air samplers, suggesting norovirus resistance to aerosolization stress.

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