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Enregistrement W1234396245 · doi:10.1385/0-89603-178-0:237

Application of the Firefly Luciferase Reporter Gene

2003· article· en· W1234396245 sur OpenAlexaff
Vincent Giguère

Notice bibliographique

RevueHumana Press eBooks · 2003
Typearticle
Langueen
DomaineBiochemistry, Genetics and Molecular Biology
Thématiquebioluminescence and chemiluminescence research
Établissements canadiensSickKids FoundationHospital for Sick Children
Organismes subventionnairesnon disponible
Mots-clésReporter geneBiologyPromoterTransactivationGeneMolecular biologyDNA-binding domainBioreporterLuciferaseResponse elementFusion geneTherapeutic gene modulationGene expressionTranscription factorTransfectionGeneticsRegulator gene

Résumé

récupéré en direct d'OpenAlex

Reporter genes have become powerful tools to study regulation of gene expression in eukaryotes. In particular, chimeric transcription units generated by the fusion of the appropriate DNA regulatory sequences to reporter genes have led to the identification of a great number of DNA control elements that constitute eukaryotic promoters. Recently, transcription factors that interact with specific DNA control elements have been purified and the cDNAs encoding these DNA-binding proteins have been cloned. Among these factors, the steroid hormone receptors have been shown to belong to a superfamily of transcription factors that regulate gene expression in a liganddependent fashion (1). The cloning of their respective cDNAs provided the opportunity to identifjr the functional domains for hormone binding, DNA binding, and transactivation present in these proteins. To perform these studies, we developed a screening assay that uses cultured cells transfected with two expression vectors (2). The first vector directs the expression of the wild-type or in vitro mutagenized receptor, and the second contains a reporter gene linked to a hormone-responsive promoter. Application of the hormone or a related synthetic drug activates the reporter gene, and the effects of the mutations on the ability of hormone/receptor complex to acti vate gene expression can be assessed. Because of the large number of experiments to be performed in these studies, the use of chloramphenicol acetyl transferase (CAT) (originally used in our cotransfection assay) as a reporter gene proved to be both laborious and onerous. In contrast, the luciferase gene possesses intrinsic qualities that most other reporter genes lack greater sensitivity, ease of use, instantaneous quantification, " environment friendliness" (no radiolabeled compound or organic solvent is used in this assay), and cost efficiency. Here, the properties of the luciferase system are briefly discussed and a simple and rapid protocol used in my laboratory to assay luciferase activity in extract obtained from cultured mammalian cells transfected with a luciferase reporter gene.

Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.

Comment cette classification a été obtenuedéplier

Prédiction distillée sur la base complète

Imitation des enseignants

Ni prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.

score de la tête « metaresearch » (Codex)0,000
score de la tête « metaresearch » (Gemma)0,000
Version: codex-gemma-dda1882f352aStatut de validation: machine_predicted_unvalidated
Catégories candidatesaucune
Catégories consensuellesaucune
DomaineSignal candidat: aucune · Signal consensuel: aucune
Devis d'étudeSignal candidat: Expérimental (laboratoire) · Signal consensuel: Expérimental (laboratoire)
GenreSignal candidat: Empirique · Signal consensuel: Empirique
Score de désaccord entre enseignants0,087
Score d'incertitude au seuil0,272

Scores Codex et Gemma par catégorie

CatégorieCodexGemma
Métarecherche0,0000,000
Méta-épidémiologie (sens strict)0,0000,000
Méta-épidémiologie (sens large)0,0000,000
Bibliométrie0,0000,000
Études des sciences et des technologies0,0000,000
Communication savante0,0000,000
Science ouverte0,0000,000
Intégrité de la recherche0,0000,000
Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger)0,0000,000

Scores machine (provisoires)

Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.

Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.

Tête enseignante Opus0,027
Tête enseignante GPT0,279
Écart entre enseignants0,252 · la distance entre les deux têtes enseignantes sur ce seul travail
Statut de validationscore_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle

Classification

machine, non validée

Prédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.

Les modèles n’ont appliqué aucune catégorie : rien dans la taxonomie ne correspondait à ce travail.
Devis d'étudeExpérimental (laboratoire)
Domainenon disponible
GenreEmpirique

Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».

En bref

Citations8
Publié2003
Routes d'admission1
Résumé présentoui

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