306 SPONTANEOUS AND PARTHENOGENETIC ACTIVATION OF RAT OOCYTES
Notice bibliographique
Résumé
Oocyte activation is one of the critical steps for the success in a mammalian cloning program. In rats, information regarding parthenogenetic activation of oocytes is limited and further studies are required to elucidate the phenomenon of spontaneous activation and to develop effective protocols of induced activation. The objectives of the study were (1) to characterize the kinetics of spontaneous activation and (2) to examine different activation regimens for rat oocytes. Oocytes were collected from 3–4-wk-old PMSG-primed Sprague Dawley rats at 14 h after hCG injection. HEPES-mR1ECM was used for oocyte collection and mR1ECM for in vitro culture (Miyoshi et al., 1995 J. Reprod. Fert. 103, 27–32). Experiment 1: Cumulus-denuded oocytes were fixed and stained with bisbenzimide (Hoechst 33342) at 10, 40, 70, 100 and 130 min after recovery. Most oocytes (92.9%) were still arrested in the metaphase II stage at 10 min after recovery, but the proportion of activated oocytes increased in a time-dependent manner, i.e. at 40 min after recovery 50% were at anaphase. At 70 min, 32.4%, 40.5%, 8.1%; at 100 min, 4.8%, 57.1%, 23.8%; and at 130 min, 0%, 3.3%, 86.7% had progressed to anaphase II, telophase II and extruded a 2nd PB, respectively. Experiment 2: Oocytes were exposed to the following activation treatments: Two sets of electrical stimuli (ES) 1 h apart composed of 3 DC pulses, 1 s apart of 1.2 kV cm-1 field strength and 60 µs duration in 0.25 M mannitol solution (Roh et al., 2003 Reprod. Fert. and Dev., 15, 135–140). After ES treatment, oocytes were exposed for 3 h to either cycloheximide (CHX, 10 µg mL-1, Group 1), 6-dimethylaminopurine (DMAP, 2 mM, Group 2), or CHX (10 µg mL-1) and DMAP (2 mM) (Group 3). Group 4 was exposed to Strontium (10 mM) for 1 h and then incubated with CHX (10 µg mL-1) and DMAP (2 mM) for 3 h. Oocytes were washed thoroughly after treatment, transferred to 50-µL droplets of mR1ECM and cultured at 37°C in a humidified atmosphere of 5% O2, 5% CO2 and 90% N2. Pronuclear formation and cleavage rates were significantly higher in Groups 2 and 3 than in Groups 1 and 4 (92.6%, 88.9% and 84.6%, 80.8% v. 49.1%, 45.6% and 62.8%, 55.8%, respectively). First, these results show that rat oocytes undergo spontaneous activation very rapidly after recovery from the oviducts. Second, activation protocols with two sets of triple DC electrical stimulation followed by exposure to DMAP or CHX/DMAP are effective means of activation. In conclusion, the above information will be useful in establishing effective protocols for cloning rats. (Financial support by NSERC and Canada Research Chairs.)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».