Tandem Native Mass-Spectrometry on Antibody–Drug Conjugates and Submillion Da Antibody–Antigen Protein Assemblies on an Orbitrap EMR Equipped with a High-Mass Quadrupole Mass Selector
Notice bibliographique
Résumé
Native mass spectrometry is emerging as a powerful tool for the characterization of intact antibodies and antibody-based therapeutics. Here, we demonstrate new possibilities provided by the implementation of a high mass quadrupole mass selector on the recently introduced Orbitrap Exactive EMR mass spectrometer. This configuration allows precursor ion selection, and thus tandem mass spectrometry experiments, even on analytes with masses in the hundreds of kilodaltons. We apply tandem mass spectrometry to localize the drug molecules in the therapeutic antibody-drug conjugate brentuximab vedotin, which displays a heterogeneous drug load. Our tandem MS data reveal that drug conjugation takes place nonhomogeneously to cysteine residues both on the light and heavy chains. Next, we analyzed how many antigens bind to IgG hexamers, based on a recently described antibody mutant IgG1-RGY that forms hexamers and activates complement in solution. The fully saturated IgG1-RGY-antigen complexes displayed a stoichiometry of IgG:CD38 of 6:12, possessing a molecular weight of about 1.26 MDa and demonstrating that IgG assembly does not hamper antigen binding. Through tandem MS experiments, we retrieve information about the spatial arrangement and stoichiometry of the subunits within this complex. These examples underscore the potential of this further modified Orbitrap-EMR instrument especially for the in-depth characterization by native tandem mass spectrometry of antibodies and antibody-based constructs.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».