Low glucose depletes glycan precursors, reduces site occupancy and galactosylation of a monoclonal antibody in CHO cell culture
Notice bibliographique
Résumé
Controlled feeding of glucose has been employed previously to enhance the productivity of recombinant glycoproteins but there is a concern that low concentrations of glucose could limit the synthesis of precursors of glycosylation. Here we investigate the effect of glucose depletion on the metabolism, productivity and glycosylation of a chimeric human-llama monoclonal antibody secreted by CHO cells. The cells were inoculated into media containing varying concentrations of glucose. Glucose depletion occurred in cultures with an initial glucose ≤5.5 mM and seeded at low density (2.5 × 10(5) cells/mL) or at high cell inoculum (≥2.5 × 10(6) cells/mL) at higher glucose concentration (up to 25 mM). Glucose-depleted cultures produced non-glycosylated Mabs (up to 51%), lower galactosylation index (GI <0.43) and decreased sialylation (by 85%) as measured by mass spectrometry and HPLC. At low glucose a reduced intracellular pool of nucleotides (0.03-0.23 fmoles/cell) was measured as well as a low adenylate energy charge (<0.57). Low glucose also reduced GDP-sugars (by 77%) and UDP-hexosamines (by 90%). The data indicate that under glucose deprivation, low levels of intracellular nucleotides and nucleotide sugars reduced the availability of the immediate precursors of glycosylation. These results are important when applied to the design of fed-batch cultures.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».