Estrategias experimentales para el estudio de las propiedades de la proteína Core del virus de la hepatitis C
Notice bibliographique
Résumé
El modelo de infeccion por el Virus de la Hepatitis C (VHC) se ha convertido en el topico de interes de numerosos equipos de investigacion, considerando el alto porcentaje de infeccion persistente asociada al VHC. En efecto, del 50 al 80% de los pacientes con infeccion por el VHC, desarrollan infeccion persistente, que puede evolucionar a cirrosis y carcinoma hepatocelular (HCC). Este modelo presenta dos obstaculos mayores para su estudio: la ausencia de un sistema eficiente de replicacion viral in vitro y el limitado numero de modelos animales. La proteina Core del VHC, ademas de ser la unidad estructural de la capside viral, parece estar implicada en las estrategias virales de persistencia y oncogenesis; nuestro grupo ha planteado estrategias experimentales para estudiar algunas de sus propiedades, tales como su capacidad inmunonoduladora en cultivos de calulas dendriticas humanas, su capacidad de modificar la expresion del ARNm en celulas HepG2 con expresion transitoria de Core y la presencia de esta proteina en tejido hepatico proveniente de pacientes con diagnostico de HCC; dichas estrategias experimentales han sido: • Produccion de la proteina Core del VHC en el sistema baculovirus y purificacion en condiciones nativas para su evaluacion en ensayos biologicos. • Expresion transitoria de la proteina Core del VHC en la linea celular HepG2, mediante transduccion con particulas recombinantes del Virus Semliki Forest (SFV). • Estudio de la expresion de p53, del estado replicativo viral y del nivel de expresion de la proteina Core del VHC, en tejido hepatico proveniente de pacientes con diagnostico de HCC asociado a la infeccion por el VHC. Aunque se logro la produccion de la proteina Core en el sistema Baculovirus, algunos inconvenientes se presentaron en la purificacion de la proteina con las tecnicas de isoelectroenfoque y electroelusion. Ensayos preliminares de la capacidad inmunomoduladora de la proteina Core obtenida en el sistema de Baculovirus, se realizaron en cultivos de celulas dendriticas obtenidas por diferenciacion de monocitos. De otra parte, se demostro la eficiencia del sistema del SFV para la expresion transitoria de altos niveles de proteina heterologa en celulas HepG2; contrario a lo observado con la proteina reportera GFP, la eficacia del sistema SFV para la expresion de la proteina Core fue menor en la linea HepG2, comparado con el resultado obtenido en BHK-21. Un analisis preliminar se realizo mediante la tecnica de DD-PCR, para la identificacion de transcritos con expresion diferencial en celulas HepG2 con expresion transitoria de Core, comparado con celulas control o con expresion transitoria de la proteina reportera, GFP. Por ultimo, la deteccion por inmunohistoquimica de la proteina Core del VHC en cortes de tejido hepatico, se logro en condiciones de pH acido con el anticuerpo monoclonal humano anti-Core B12.F8. REFERENCIAS 1. HENAO F, ALVAREZ C, RUBIO I, BALCAZAR N, NAVAS MC. Expression of heterologous protein in the human hepatoma cell line HepG2 using Semliki Forest virus expression system. ASV 22 rd Annual meeting. USA, 2003. 2. RUBIO I, HENAO F, ALVAREZ C, ARIAS A, ORTIZ B, COMBITA AL, NAVAS MC. Hepatitis C Virus Core protein production and purification in native conditions for functional assays in monocyte derived dendritric cells culture. ASV 23 rd Annual meeting. Canada, 2004.
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Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».