Construction of a Bicistronic Lentiviral Vector for Efficient Transduction and Expression of Multiple Therapeutic Genes in Adult Stem Cells
Notice bibliographique
Résumé
Adult stem cells (ASC) have emerged as a potentially useful substrate for neovascularization and repair of ischemic myocardium and injured blood vessels. Pseudotyped retroviral vectors efficiently transduce ASC, providing long‐term stable expression of therapeutic genes. However, the cytotoxicity of these vectors is increased in conditions where multiple transductions may be required to simultaneously express more than one gene. In order to minimize the toxicity associated with multiple retroviral transductions we designed a bicistronic lentiviral vector for simultaneous expression of two genes. To construct the bicistronic vector we cloned a modified internal ribosome entry sequence (IRES) from pIRES2AcGFP1 between two reporter genes (Green Fluorescent protein, AcGFP1 and Firefly Luciferase, Luc). To test the strength of translation of the IRES we generated two complementary vectors, the first with GFP and Luc cloned 5′ and 3′ of the IRES sequence, respectively; the second vector with the reporter genes cloned in the reverse order with respect to the IRES. Luciferase activity was determined using the Bright‐Glo Luciferase Assay System. The first construct was packaged into lentiviral particles by four plasmid transfection into HEK 293FT cells, using VSG‐V for viral pseudotyping. Analyis of reporter gene expression in transduced HEK 293 cells showed that the bicistronic expresses both reporter genes with minimal attenuation of expression by the IRES sequence. Transduction efficiency of cells was consistently > 40% with no signs of cytotoxicity. Supported by grants from CIHR and HSFO to L.G. Melo and C.A. Ward
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».