Expression, purification, crystallization and preliminary crystallographic analysis of<i>Trypanosoma brucei</i>phosphofructokinase
Notice bibliographique
Résumé
Phosphofructokinase from Trypanosoma brucei (TbPFK) was purified from a recombinant expression system in Escherichia coli by metal-affinity chromatography via its N-terminal His tag. The yield was 15-20 mg of pure enzyme per litre of culture. M(r) was shown to be 55 585 by mass spectrometry. Crystals suitable for X-ray diffraction analysis were obtained by the hanging-drop method of vapour diffusion with sodium formate as the precipitating agent. Monoclinic crystals of the apoenzyme grew within one week, as did orthorhombic crystals of PFK in the presence of enzymic reaction products or an active-site inhibitor. Initial attempts to solve the structure by molecular replacement with bacterial PFK structures as search models proved unrewarding, but a multiple-copy search with a polyalanine model was successful. In addition, heavy-atom soaking with platinum and mercury has yielded derivatives suitable for X-ray diffraction. A combination of the phase information from the molecular-replacement solution and the heavy-atom derivatives should allow structure solution of TbPFK. The availability of this first eukaryotic PFK structure will be of particular significance for structure-based drug design and will also provide important additional structural evidence for the allosteric control of PFK activity.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,005 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».