Lipid-Induced Conformational Switch in the Membrane Binding Domain of CTP:Phosphocholine Cytidylyltransferase: A Circular Dichroism Study
Notice bibliographique
Résumé
CTP:phosphocholine cytidylyltranferase (CCT) regulates phosphatidylcholine (PC) biosynthesis. Its activity is controlled by reversible interactions with membrane lipids, mediated by an internal segment referred to as domain M. Although domain M peptides adopt an amphipathic alpha-helical structure when membrane bound, the structure of this domain in the context of the whole enzyme in the lipid-free and lipid-bound state is unknown. Here we derive lipid-induced secondary structural changes in CCTalpha using circular dichroism and three deconvolution programs. The analysis of two fragments, CCT236 (CCT1-236, housing the catalytic domain) and a synthetic domain M peptide (CCT237-293) aided the assignment of structural change to specific domains. To carry out this study, we developed a micellar lipid activating system that would avoid generation of CCT-induced lipid vesicle aggregates that interfere with the CD analysis. Lysophosphatidylcholine/phosphatidylglycerol (LPC/PG) mixed micelles supported full activation of CCT and caused an increase in the alpha-helix content of full-length CCT from 25 to 41%, at the expense of all other conformations. LPC/PG also induced an increase in alpha-helix content of the domain M peptide from 7 to 85% at the expense of all other conformers. This lipid system did not significantly affect the secondary structure of CCT236, nor did it affect the proteolytic fragmentation pattern of this region within full-length CCT, suggesting that the region containing the catalytic domain changes very little upon membrane activation of CCT. Our data suggest that lipids trigger a conformational switch in domain M from a mixed structure to an alpha-helix, thus creating a hydrophobic face for membrane insertion. Our results negate the idea that domain M is entirely helical in both the soluble and membrane-bound forms of CCT.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».