The Canine Factor VIII 3′-Untranslated Region and a Concatemeric Hepatocyte Nuclear Factor 1 Regulatory Element Enhance Factor VIII Transgene Expression <i>In Vivo</i>
Notice bibliographique
Résumé
If gene therapy is to be an effective treatment modality for hemophilia A, therapeutic levels and tissue-restricted expression of factor VIII (FVIII) must be achieved through optimization of transgene expression. To this end, we incorporated three types of sequence elements into a canine B domain-deleted FVIII transgene cassette and individually evaluated their effect on FVIII transgene expression. Functional FVIII activity was initially assessed in vitro and hydrodynamic injection of the different transgene constructs into mice was subsequently used as a model to compare in vivo expression of the various modified transgenes. Our results demonstrate that in vitro transgene expression is, in these studies, not a good predictor of in vivo transgene performance. In vivo analysis of a hybrid tissue-restricted promoter element, consisting of a concatemer of five hepatocyte nuclear factor 1 (HNF-1) consensus-binding motifs juxtaposed to the human FVIII proximal promoter, indicates that it is as efficient at mediating expression of the FVIII protein as the cytomegalovirus promoter. Addition of the full-length canine FVIII 3'-UTR also enhances transgene expression of FVIII in vivo. Sequence analysis of the canine FVIII 3'-UTR and human FVIII 3'-UTR indicates that the former lacks instability sequences and may therefore be more effective in stabilizing FVIII mRNA. Subsequent inclusion of FVIII introns 16 and 17 into the natural locations of the transgene disrupted mRNA processing and abolished expression of the FVIII protein. Introduction of intron 17 proximal to the FVIII cDNA did not enhance in vivo expression of canine FVIII from the transgene.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».