Cysteines 431 and 1074 Are Responsible for Inhibitory Disulfide Cross-linking between the Two Nucleotide-binding Sites in Human P-glycoprotein
Notice bibliographique
Résumé
Human wild-type and Cys-less P-glycoproteins were expressed in Pichia pastoris and purified in high yield in detergent-soluble form. Both ran on SDS gels as a single 140-kDa band in the presence of reducing agent and showed strong verapamil-stimulated ATPase activity in the presence of added lipid. The wild type showed spontaneous formation of higher molecular mass species in the absence of reducing agent, and its ATPase was activated by dithiothreitol. Oxidation with Cu(2+) generated the same higher molecular mass species, primarily at 200 and approximately 300 kDa, in high yield. Cross-linking was reversed by dithiothreitol and prevented by pretreatment with N-ethylmaleimide. Using proteins containing different combinations of naturally occurring Cys residues, it was demonstrated that an inhibitory intramolecular disulfide bond forms between Cys-431 and Cys-1074 (located in the Walker A sequences of nucleotide-binding sites 1 and 2, respectively), giving rise to the 200-kDa species. In addition, dimeric P-glycoprotein species ( approximately 300 kDa) form by intermolecular disulfide bonding between Cys-431 and Cys-1074. The ready formation of the intramolecular disulfide between Cys-431 and Cys-1074 establishes that the two nucleotide-binding sites of P-glycoprotein are structurally very close and capable of intimate functional interaction, consistent with available information on the catalytic mechanism. Formation of such a disulfide in vivo could, in principle, underlie a regulatory mechanism and might provide a means of intervention to inhibit P-glycoprotein.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».