Independent Lec1A CHO Glycosylation Mutants Arise from Point Mutations in <i>N</i>-Acetylglucosaminyltransferase I That Reduce Affinity for Both Substrates. Molecular Consequences Based on the Crystal Structure of GlcNAc-TI<sup>,</sup>
Notice bibliographique
Résumé
A key enzyme in regulating the maturation of N-linked glycans is UDP-N-acetylglucosamine:alpha-3-D-mannoside beta-1,2-N-acetylglucosaminyltransferase I (GlcNAc-TI, EC 2.4.1.101). Lec1 CHO cells lack GlcNAc-TI activity and synthesize only the oligomannosyl class of N-glycans. By contrast, Lec1A CHO mutants have weak GlcNAc-TI activity due to the reduced affinity of GlcNAc-TI for both the UDP-GlcNAc and Man(5)GlcNAc(2)Asn substrates. Lec1A CHO mutants synthesize hybrid and complex N-glycans, albeit in reduced amounts compared to parental CHO cells. In this paper, we identify two point mutations that gave rise to the Lec1A phenotype in three independent Lec1A CHO mutants. The G634A mutation in Lec1A.2C converts an aspartic acid to an asparagine at amino acid 212, disrupting a conserved DXD motif (E(211)DD(213) in all GlcNAc-TIs) that makes critical interactions with bound UDP-GlcNAc and Mn(2+) ion in rabbit GlcNAc-TI. The C907T mutation in Lec1A.3E and Lec1A.5J converts an arginine conserved in all GlcNAc-TIs to a tryptophan at amino acid 303, altering interactions that are important in stabilizing a critical structural element in rabbit GlcNAc-TI. Correction of each mutation by site-directed mutagenesis restored their GlcNAc-TI activity and lectin binding properties to parental levels. The effect of the two amino acid changes on GlcNAc-TI catalysis is discussed in relation to the crystal structure of rabbit GlcNAc-TI complexed with manganese and UDP-GlcNAc.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».