Evaluating the Mutagenic Activity of Targeted Endonucleases Containing a <i>Sharkey</i> FokI Cleavage Domain Variant in Zebrafish
Notice bibliographique
Résumé
Synthetic targeted endonucleases such as zinc finger nucleases (ZFNs) and transcription activator-like effector nucleases (TALENs) have recently emerged as powerful tools for targeted mutagenesis, especially in organisms that are not amenable to embryonic stem cell manipulation. Both ZFNs and TALENs consist of DNA-binding arrays that are fused to the nonspecific FokI nuclease domain. In an effort to improve targeted endonuclease mutagenesis efficiency, we enhanced their catalytic activity using the Sharkey FokI nuclease domain variant. All constructs tested display increased DNA cleavage activity in vitro. We demonstrate that one out of four ZFN arrays containing the Sharkey FokI variant exhibits a dramatic increase in mutagenesis frequency in vivo in zebrafish. The other three ZFNs exhibit no significant alteration of activity in vivo. Conversely, we demonstrate that TALENs containing the Sharkey FokI variant exhibit absent or severely reduced in vivo mutagenic activity in zebrafish. Notably, Sharkey ZFNs and TALENs do not generate increased toxicity-related defects or mortality. Our results present Sharkey ZFNs as an effective alternative to conventional ZFNs, but advise against the use of Sharkey TALENs.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».