In Vitro Characterization of a Purified NS2/3 Protease Variant of Hepatitis C Virus
Notice bibliographique
Résumé
The cleavage of the hepatitis C virus polyprotein between the nonstructural proteins NS2 and NS3 is mediated by the NS2/3 protease, whereas the NS3 protease is responsible for the cleavage of the downstream proteins. Purification and in vitro characterization of the NS2/3 protease has been hampered by its hydrophobic nature. NS2/3 protease activity could only be detected in cells or in in vitro translation assays with the addition of microsomal membranes or detergent. To facilitate purification of this poorly characterized protease, we truncated the N-terminal hydrophobic domain, resulting in an active enzyme with improved biophysical properties. We define a minimal catalytic region of NS2/3 protease retaining autocleavage activity that spans residues 904-1206 and includes the C-terminal half of NS2 and the N-terminal NS3 protease domain. The NS2/3 (904-1206) variant was purified from Escherichia coli inclusion bodies and refolded by gel filtration chromatography. The purified inactive form of NS2/3 (904-1206) was activated by the addition of glycerol and detergent to induce autocleavage at the predicted site between Leu(1026) and Ala(1027). NS2/3 (904-1206) activity was dependent on zinc ions and could be inhibited by NS4A peptides, peptides that span the cleavage site, or an N-terminal peptidic cleavage product. This NS2/3 variant will facilitate the development of an assay suitable for identifying inhibitors of HCV replication.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».