Structural and Functional Analysis of ProQ: An Osmoregulatory Protein of <i>Escherichia coli</i>
Notice bibliographique
Résumé
Transporter ProP of Escherichia coli senses extracellular osmolality and responds by mediating cytoplasmic accumulation of organic solutes such as proline. Lesions at the proQ locus reduce ProP activity in vivo. ProQ was previously purified and characterized. Homology modeling predicted that ProQ possesses an alpha-helical N-terminal domain (residues 1-130) and a beta-sheet C-terminal domain (residues 181-232) connected by an unstructured linker. In this work, we tested the structural model for ProQ, explored the solubility and folding of full length ProQ and its domains in diverse buffers, and tested the impacts of the putative ProQ domains on ProP activity in vivo. Limited tryptic proteolysis of ProQ revealed protease resistant fragments corresponding to the predicted N-terminal and C-terminal domains. Polypeptides corresponding to the predicted N- and C-terminal domains could be overexpressed and purified to near homogeneity using nickel affinity, size exclusion and reversed phase chromatographies. Circular dichroism spectroscopy of the purified proteins revealed that the N-terminal domain was predominantly alpha-helical, whereas the C-terminal domain was predominantly beta-sheet, as predicted. The domains were soluble and folded in neutral buffers containing 0.6 M NaCl. The N-terminal domain was soluble and folded in 0.1 M MES (2-[N-morpholino]-ethane sulfonic acid) at pH 5.6. Despite high solubilities, the proteins were not well folded in Na citrate (0.1 M, pH 2.3). The ProQ domains and the linker were expressed at physiological levels, singly and in combination, in bacteria lacking the chromosomal proQ locus. Among these proteins, the N-terminal domain could partially complement the proQ deletion. The full length protein and a variant lacking only the linker restored full activity of the ProP protein.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».