Chimeric G Proteins Extend the Range of Insect Cell-Based Functional Assays for Human G Protein-Coupled Receptors
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
We previously described a functional assay for G protein-coupled receptors (GPCRs) based on stably transformed insect cells and using the promiscuous G protein Galpha16. We now show that, compared with Galpha16, the use of chimeric Galphaq subunits with C-terminal modifications (qi5-HA, qo5-HA, or qz5-HA) significantly enhances the ability of insect cells to redirect Gi-coupled GPCRs into a Gq-type signal transduction pathway. We coexpressed human Gi-coupled GPCRs, G protein alpha subunits (either a chimeric Galphaq or Galpha16), and the calcium-sensitive reporter protein aequorin in Sf9 cells using a nonlytic protein expression system, and measured agonist-induced intracellular calcium flux using a luminometer. Three of the GPCRs (serotonin 1A, 1D, and dopamine D2) were functionally redirected into a Gq-type pathway when coexpressed with the chimeric G proteins, compared with only one (serotonin 1A) with Galpha16. We determined agonist concentration-response relationships for all three receptors, which yielded EC50 values comparable with those achieved in mammalian cell-based assay systems. However, three other Gi-coupled GPCRs (the opioid kappa1 and delta1 receptors, and serotonin 1E) were not coupled to calcium flux by either the G protein chimeras or Galpha16. Possible reasons and solutions for this result are discussed.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle