Expression, purification, and activities of full‐length and truncated versions of the integral membrane protein Vpu from HIV‐1
Notice bibliographique
Résumé
Vpu is an 81-residue accessory protein of HIV-1. Because it is a membrane protein, it presents substantial technical challenges for the characterization of its structure and function, which are of considerable interest because the protein enhances the release of new virus particles from cells infected with HIV-1 and induces the intracellular degradation of the CD4 receptor protein. The Vpu-mediated enhancement of the virus release rate from HIV-1-infected cells is correlated with the expression of an ion channel activity associated with the transmembrane hydrophobic helical domain. Vpu-induced CD4 degradation and, to a lesser extent, enhancement of particle release are both dependent on the phosphorylation of two highly conserved serine residues in the cytoplasmic domain of Vpu. To define the minimal folding units of Vpu and to identify their activities, we prepared three truncated forms of Vpu and compared their structural and functional properties to those of full-length Vpu (residues 2-81). Vpu(2-37) encompasses the N-terminal transmembrane alpha-helix; Vpu(2-51) spans the N-terminal transmembrane helix and the first cytoplasmic alpha-helix; Vpu(28-81) includes the entire cytoplasmic domain containing the two C-terminal amphipathic alpha-helices without the transmembrane helix. Uniformly isotopically labeled samples of the polypeptides derived from Vpu were prepared by expression of fusion proteins in E. coli and were studied in the model membrane environments of lipid micelles by solution NMR spectroscopy and oriented lipid bilayers by solid-state NMR spectroscopy. The assignment of backbone resonances enabled the secondary structure of the constructs corresponding to the transmembrane and the cytoplasmic domains of Vpu to be defined in micelle samples by solution NMR spectroscopy. Solid-state NMR spectra of the polypeptides in oriented lipid bilayers demonstrated that the topology of the domains is retained in the truncated polypeptides. The biological activities of the constructs of Vpu were evaluated. The ion channel activity is confined to the transmembrane alpha-helix. The C-terminal alpha-helices modulate or promote the oligomerization of Vpu in the membrane and stabilize the conductive state of the channel, in addition to their involvement in CD4 degradation.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».