Rational Design of Murine Secreted Alkaline Phosphatase for Enhanced Performance as a Reporter Gene in Mouse Gene Therapy Preclinical Studies
Notice bibliographique
Résumé
Many preclinical gene therapy studies use a reporter gene to evaluate vector design and performance in mouse models of human disease. Unfortunately, most commonly used reporter genes are immunogenic in mice, which confounds accurate evaluation of vector function. In previous studies, we showed that the murine secreted alkaline phosphatase (mSEAP) gene functions well as a simple and sensitive reporter gene in mice. In this study, we have used rational design to enhance mSEAP performance. The majority of native mSEAP remains attached to the outer surface of the cell through glycan phosphatidylinositol linkage; removal of the carboxy-terminal tail of mSEAP resulted in a dramatic enhancement of release of the protein into cell culture medium and into mouse plasma in whole animal experiments. We increased the heat stability of mSEAP through mutation of a key residue in the crown domain of the protein (H451E), thus allowing us to reduce endogenous, background AP activity through heat inactivation for enhanced sensitivity. We show that these alterations in mSEAP result in enhanced performance in tissue culture and mouse studies. Taken together, these data illustrate that mSEAP is a sensitive, nonimmunogenic reporter for preclinical mouse studies. In this study, Christou and Parks use rational design to enhance murine secreted alkaline phosphotase (mSEAP) performance. Specifically, the authors removed the carboxy-terminal tail of mSEAP, which resulted in a dramatic enhancement of release of the protein into cell culture medium and into mouse plasma in whole animal experiments. They also increased the heat stability of mSEAP through mutation of a key residue in the crown domain of the protein (H451E), which led to reduced endogenous, background alkaline phosphatase activity and enhanced sensitivity.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».