Practical guidelines for the high‐sensitivity detection and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria clones by flow cytometry
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is a life-threatening disorder caused by an inability to make glyco-phosphatidyl-inositol (GPI) anchors. While flow cytometry is the method of choice to detect the loss of GPI-linked proteins, the development and validation of sensitive, standardized, methodologies have been hampered by the rarity of this disease and by technical difficulties in the accurate identification of PNH cells. METHODS: Guidelines for the diagnosis and monitoring of PNH by flow cytometry were recently published by the International Clinical Cytometry Society (ICCS). However, specific reagent cocktails, and associated detailed analytic strategies were not directly addressed therein. In this supporting document based on the ICCS guidelines, we provide concise practical protocols for the high-sensitivity detection of PNH RBCs and WBCs (both granulocytes and monocytes). RESULTS: The CD235aFITC/CD59PE assay described was capable of detecting as few as 20 Type III PNH RBCs per million cells. Frequencies of Type III PNH cells in 10 normal samples were in the 0-6 per million RBCs. The high-resolution granulocyte/neutrophil assays described in this study could detect PNH phenotypes consistently at a level of 0.01% sensitivity. Frequencies of PNH phenotypes in normal individuals were in the 0-10 per million granulocytes/neutrophils range. CONCLUSIONS: The careful screening and selection of specific antibody conjugates has allowed the development of reagent cocktails suitable for high-sensitivity flow cytometric detection of PNH RBCs and PNH WBCs. The reagent cocktails described herein can be used on a variety of clinical flow cytometers equipped with four or more photo multiplier tubes.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,020 | 0,025 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,002 | 0,002 |
| Bibliométrie | 0,006 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,002 |
| Communication savante | 0,002 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,005 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,005 | 0,004 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,012 | 0,023 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».