The Periplasmic Domains of<i>Escherichia coli</i>HflKC Oligomerize through Right-Handed Coiled-Coil Interactions
Notice bibliographique
Résumé
The periplasmic domains of the Escherichia coli HflK and HflC were coexpressed and purified. The two polypeptides copurified in a 1:1 ratio, as determined by quantitative amino acid analysis. Circular dichroism studies showed the complex to have substantial helical/coiled-coil content that melted with midpoints in the range of 26-29 degrees C depending upon the concentration, implying a reversible oligomerization. The average molecular weight of the soluble HflKC determined by sedimentation equilibrium ultracentrifugation using a single-species model varied with rotor speed, providing further evidence of concentration-dependent oligomerization. The data were well-fit by models that specified a protomer to n-mer oligomerization, with the heterodimeric HflKC as the protomer and values of n between 7 and 10. Multiple-sequence alignments of both HflK and HflC revealed regions near the C termini to contain 11-residue hendecad repeats, indicative of right-handed coiled coils, with characteristic small residues in the a, f, h, and j positions. To test the importance of the small size of these positions, two residues in the HflC domain, Ala-262 in a f position and Gly-268 in an a position, were mutated to isoleucine. The HflKC:A262I mutant complex showed lower helicity than the wild type, and its melting was less concentration-dependent. During purification of HflKC:G268I, the mutated HflC subunit precipitated, leaving a preparation of the pure peripheral HflK domain. This polypeptide behaved as a monomer in sedimentation equilibrium experiments and showed low helicity, implying that the protein conformation is largely dependent upon heteromeric subunit interactions. These results demonstrate the importance of right-handed coiled-coil interactions in the oligomerization of HflKC, and a model entailing the formation of a right-handed helical barrel is proposed.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».