A Glutamine to Glutamate Mutation at Position 170 (Q170E) in the Rabbit Na<sup>+</sup>/Glucose Cotransporter, rSGLT1, Enhances Binding Affinity for Na<sup>+</sup>
Notice bibliographique
Résumé
Using cysteine mutagenesis and chemical modification by methanethiosulfonate derivatives, it was demonstrated that the external putative loop, joining transmembrane segments (TM's) IV-V of rabbit Na+/glucose cotransporter, rSGLT1, forms part of a Na+ binding and voltage sensing domain. Within this region, exposure to cationic (2-aminoethyl)methanethiosulfonate hydrobromide (MTSEA) inhibited F163C, A166C, and L173C, but anionic sodium (2-sulfonatoethyl)methanethiosulfonate (MTSES) had no effect. Unexpectedly, MTSEA had no effect on Q170C; however, MTSES profoundly altered Q170C charge transfer and turnover, leaving Na+ and sugar binding affinity unchanged, but mutation of glutamine to anionic glutamate (Q170E) shifted V(0.5) to positive potentials, suggesting enhanced Na+ affinity. To clarify the role of glutamine 170 in Na+ interaction, we embarked on a more detailed investigation of Q170E using the two-microelectrode voltage clamping in Xenopus oocytes. Compared to wild-type (wt) rSGLT1, Q170E exhibits (i) a 2-fold decrease in methyl alpha-D-glucopyranoside affinity (-150 to -90 mV), (ii) a 5-fold increase in Na+ affinity (-150 to -100 mV) with less voltage dependency, (iii) reduced Na+ leak, and (iv) two transient current decay constants (tau(fast), tau(slow)) compared to three (tau(fast), tau(medium), tau(slow)) for wt, and computer simulation of Q170E pre-steady-state currents with a four-state kinetic model yields parameters similar to wt SGLT1, except for a reduced Na+ debinding rate constant compared to wt. Taken together, the data strengthen the conclusion that residue 170 lies in the Na+ pathway and provide the first evidence that it participates in determining Na+ binding.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».