Fluorescence microscopy investigations of ligand propagation and accessibility under adherent cells
Notice bibliographique
Résumé
Fluorescence microscopy methods including total internal reflection fluorescence and confocal laser scanning microscopy have played a major role in modern cell biology research by permitting imaging of fluorescently tagged macromolecules in living cells. These methods are often used to examine the initial events in signal transduction, which involve interactions occurring between membrane receptors and ligands such as antibodies and growth factors. Most quantitative biophysical applications using these fluorescence imaging methods, including ligand binding assays, are based on the assumption that the fluorophore label of interest has equal access to all areas of the membrane on the cell. Our findings suggest that there is limited accessibility of fluorophores (25±2%)(-) under the basal membrane of adherent CHO-K1 cells expressing epidermal growth factor receptor plated on a bare glass in standard two-dimensional tissue cultures. The authors present a detailed study of the extent to which a small fluorescent dye molecule (Alexa 647) is able to propagate under the basal membrane of cells plated on a variety of biologically compatible substrates: fibronectin, bovine serum albumin, poly-d-lysine, collagen I, collagen IV, Geltrex™, and fibronectin such as binding polymer. For nonspecific dye propagation the best overall accessibility was achieved using a thin layer preparation of a commercially available basement membrane matrix, Geltrex™ (67±8%). Coupling of a specific high affinity ligand (epidermal growth factor) to the dye did result in a moderate increase in propagation for most substrates examined. Despite the overall increase in propagation for most substrates (60%-80%), large areas under the central regions of the adherent cells still remained inaccessible to the fluorescently labeled ligand. More importantly, the presence of the specific ligand did not result in consistent increase in ligand propagation. Taken together these results suggest that the reduced accessibility is not exclusively due to steric effects, and the chemistry of both the ligand and the substrate may be important when working under conditions of reduced dimensionality.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».