Proteomic Analysis of Src Family Kinases Signaling Complexes in Golgi/Endosomal Fractions Using a Site-Selective Anti-Phosphotyrosine Antibody: Identification of LRP1-Insulin Receptor Complexes
Notice bibliographique
Résumé
A role for Src Family Kinases (SFKs) in the dynamics of endocytic and secretory pathways has previously been reported. Identification of low-abundance compartmentalized complexes still remains challenging, highlighting the need for novel tools. Here we describe analysis of SFK-signaling complexes of hepatic Golgi/endosomes (G/E) fractions by sequential affinity enrichment of proteins. Mouse G/E permeabilized membranes were first validated in terms of electron microscopy, 1-D electrophoresis (1-DE), insulin-mediated endocytosis and protein content. With the use of quantitative N-terminal labeling of tryptic peptides (iTRAQ), 1-DE and IEF tryptic peptides separation methods, a total of 666 proteins were identified, including the SFK Lyn. Following insulin injection, a series of proteins were recognized by an anti-phosphotyrosine antibody (alpha P42-2) raised against the residue most frequently phosphorylated by SFK on the adenoviral protein E4orf4 and that cross-reacts with endosomal SFK targets. By using affinity chromatography coupled with mass spectrometry, we identified 16 proteins classified as (1) recycling receptors, (2) vesicular trafficking proteins, (3) actin network proteins, (4) metabolism proteins, or (5) signaling proteins. One of these proteins, low density lipoprotein-related protein 1 (LRP1), which is a known SFK substrate, was found to associate with the internalized insulin receptor (IR), suggesting the presence of a co-internalization process. The identification of these proteomes should, thus, contribute to a better understanding of the molecular mechanisms that regulate trafficking events and insulin clearance.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».