Increased t-PA Yields Using Ultrafiltration of an Inhibitory Product from CHO Fed-Batch Culture
Notice bibliographique
Résumé
Fed-batch operation for the production of t-PA using Chinese Hamster Ovary (CHO) cells was optimized using serial and parallel experimentation. The feed, an isotonic concentrate, was improved to obtain 2- to 2.5-fold increases in integrated viable cell days versus batch. With a low glucose inoculum train, the viability index was further increased up to 4.5-fold. Hydrolysates were substituted for the amino acid portion of the concentrate with no significant change in fed-batch results. The concentrate addition rate was based on a constant 4 pmol/cell.day glucose uptake rate that maintained a relatively constant glucose concentration (approximately 3 mM). Increased viable cell indices did not lead to concomitant increases in t-PA concentrations compared to batch. The fed-batch concentrate and feeding strategy were shown to be effective in hybridoma culture, where a 4-fold increase in viable cell index yielded a 4-fold increase in antibody concentration. The half-life of t-PA decreased from 43 to 15 days with decreasing cell viability (from 92% to 71%), but this was not sufficient to explain the apparent t-PA threshold. Instead, the CHO results were explained by a reduction in t-PA production at higher extracellular t-PA concentrations that limited the fed-batch maximum at 35 mg/L for the cell line investigated. Analysis of both the total and t-PA mRNA levels revealed no response to increasing extracellular t-PA concentrations upon exogenous additions. Instead, intracellular t-PA levels were increased, revealing a possible secretory pathway limitation. A new reactor configuration was developed using an acoustic filter to retain the cells in the reactor while an ultrafiltration module stripped t-PA from the clarified medium before the permeate was returned to the reactor. By adding this harvesting step, the t-PA fed-batch production was increased over 2-fold, up to a yield of 80 mg/L.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».