INDUCTION OF HUMAN HISTO-BLOOD GROUP A ANTIGEN EXPRESSION IN MOUSE CELLS BY GENE THERAPY USING LENTIVIRAL VECTORS HARBORING HUMAN ABH-RELATED GLYCOSYLTRANSFERASE GENES
Notice bibliographique
Résumé
P966 Aims: We recently discovered that ABO-incompatibility is not a barrier in infant heart transplantation and that infant recipients of ABO-incompatible hearts develop B cell tolerance to specific donor-type ABH antigens. We hypothesize that induction of cell surface human histo-blood group A antigen expression in neonatal mice will induce specific B cell tolerance, allowing us to generate a murine model for mechanistic investigation. This study determined the feasibility of inducing human A antigen expression in murine cells, both in vitro and in vivo, using replication-deficient lentiviral vectors capable of stable long-term integration into the cellular genome. Methods: The human α-1,2-fucosyltransferase (FUT1; for H antigen expression) gene was cloned into a lentiviral vector, and the human A glycosyltransferase (A-trs; for A antigen expression) gene was cloned into a bicistronic lentiviral vector also containing the green fluorescent protein (GFP) gene. Infection-competent lentiviral particles were produced by co-transfection of 293T cells with FUT1 or A-trs vector and 2 helper plasmids. Viral supernatants were concentrated for titers up to 5x109 transducing units/ml. HeLa (human cervical carcinoma cells of histo-blood group O origin), LTA (mouse fibroblast) and SVEC-10 (mouse endothelial) cells were infected with FUT1 and/or A-trs lentiviral particles. GFP and cell surface H and A antigen expression were assessed by ‘Cellular ELISA’ (CELISA) and confocal microscopy. Neonatal BALB/c mice were injected with FUT1 and A-trs lentiviral particles; GFP was detected post-injection by flow cytometry. Results: Infection with FUT1 lentiviral particles enhanced H antigen expression by HeLa cells. Expression of A antigen was moderate in HeLa cells infected with only A-trs lentiviral particles and appreciably higher with FUT1 co-infection. LTA and SVEC-10 cells infected with FUT1 particles exhibited dose-dependent H antigen expression. Expression of A antigen by LTA and SVEC-10 cells occurred only when infected with both FUT1 and A-trs, suggesting the murine homologue of FUT1 does not provide H antigen expression sufficient for A antigen synthesis. Expression of A antigen was dose-dependent; doses of H and A lentivirus for optimal A antigen expression were determined. Fluorescent imaging of H and A antigen-positive cells was consistent with CELISA data. All cells exhibiting surface A antigen also showed GFP fluorescence. FACS analysis of peripheral mononuclear cells from mice injected as neonates with FUT1 and A-trs lentiviral particles revealed GFP expression in 18% of cells, 9 days post-injection. Conclusions: Our lentiviral vectors induced H and A antigen expression by human and mouse cells. Mouse cells required induction of H antigen for cell surface expression of A antigen. GFP expression in mice 9 days after neonatal injection with FUT1 and A-trs lentiviral particles suggests in vivo induction of H and A antigen expression.
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
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