399. Solid Nanobeads Prevents Polycations from Entering the Nuclei and Enhanced Transfection Efficiency
Notice bibliographique
Résumé
Objective: Employment of polycations for gene delivery to treat human diseases remains in doubt as long as the potential for polycations to adversely interact with host genes exists, which is incurred from entering of polycations into nuclei during gene delivery. In this study, we address this issue by conjugating polymer vector- gene complexes to silica nanobeads (SNB) and evaluated the transfection efficacy of marker and therapeutic genes. Methods: The poly-ethyleneimine vector (PEI)/DNA complexes were conjugated to SNB via a Sulfo-NHS-LC-Biotin linker. Luciferase and LacZ were used as reporter genes and VEGF-165 was used as therapeutic gene. Fluorescent labeling and confocal microscopy were employed to tack the paths of PEI/DNA complexes and SNB/PEI/ DNA complexes from endocytosis to gene expression. Stability of the SNB/PEI/DNA complexes was evaluated by DNase I protection assay. In vitro transfection efficacy of SNB/PEI/DNA was assessed in 4 different cell lines and compared with unconjugated PEI/DNA. In vivo, SNB/PEI/DNA complexes were systematically injected via tail vein of the mouse (n=12). Transfection efficacy of marker and therapeutic genes was assessed in the organs (heart, lung, spleen, kidney and liver) by luciferase assay, immunostaining and Western blotting. Results/Discussion: The SNB/PEI/DNA complexes were very stable and could provide more effective protection to DNA from nuclease degradation than PEI/DNA complexes. Confocal microscopy showed that PEI/DNA complexes entered nuclei in the form of ordered structures. In contrast, SNB/PEI/DNA complexes released DNA into the nuclei while SNB kept the PEI perinuclei of the cells. In vitro, 10- to 50-fold higher transfection efficiency for SNB/PEI/DNA complexes was observed compared with PEI/DNA complexes alone. In vivo, systematically injected SNB/PEI/DNA complexes resulted in effective over expression of marker and therapeutic genes. Conclusions: Conjugating polycation vector-gene complexes to solid nanobeads enhanced transfection efficiency and inhibited polymer to enter the nuclei, which may offer a novel way to prevent the risk of interference of polymer with native host DNA.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
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