Modified gateway system for double shRNA expression and Cre/lox based gene expression
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: The growing need for functional studies of genes has set the stage for the development of versatile tools for genetic manipulations. RESULTS: Aiming to provide tools for high throughput analysis of gene functions, we have developed a modified short hairpin RNA (shRNA) and gene expression system based on Gateway Technology. The system contains a series of entry and destination vectors that enables easy transfer of shRNA or cDNA into lentiviral expression systems with a variety of selection or marker genes (i.e. puromycin, hygromycin, green fluorescent protein-EGFP, yellow fluorescent protein-YFP and red fluorescent protein-dsRed2). Our shRNA entry vector pENTR.hU6.hH1 containing two tandem human shRNA expression promoters, H1 and U6, was capable of co-expressing two shRNA sequences simultaneously. The entry vector for gene overexpression, pENTR.CMV.ON was constructed to contain CMV promoter with a multiple cloning site flanked by loxP sites allowing for subsequent Cre/lox recombination. Both shRNA and cDNA expression vectors also contained attL sites necessary for recombination with attR sites in our destination expression vectors. As proof of principle we demonstrate the functionality and efficiency of this system by testing expression of several cDNA and shRNA sequences in a number of cell lines. CONCLUSION: Our system is a valuable addition to already existing library of Gateway based vectors and can be an essential tool for many aspects of gene functional studies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,002 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,007 | 0,008 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».