Using 2-Aminopurine Fluorescence To Detect Base Unstacking in the Template Strand during Nucleotide Incorporation by the Bacteriophage T4 DNA Polymerase
Notice bibliographique
Résumé
The fluorescence of the base analogue 2-aminopurine (2AP) was used to detect physical changes in the template strand during nucleotide incorporation by the bacteriophage T4 DNA polymerase. Fluorescent enzyme-DNA complexes were formed with 2AP placed in the template strand opposite the primer terminus (the n position) and placed one template position 5' to the primer terminus (the n + 1 position). The fluorescence enhancement for 2AP at the n position was shown to be due to formation of the editing complex, which indicates that the 2AP-T terminal base pair is recognized primarily as a mismatch. 2AP fluorescence at the n + 1 position, however, was a reporter for DNA interactions in the polymerase active center that induce intrastrand base unstacking. T4 DNA polymerase produced base unstacking at the n + 1 position following formation of the phosphodiester bond. Thus, the increase in fluorescence intensity for 2AP at the n + 1 position could be used to measure the nucleotide incorporation rate in primer extension reactions in which 2AP was placed initially at the n + 2 position. Primer extension occurred at the rate of about 314 s(-1). The amount of base unstacking at the template n + 1 position was sensitive to the local DNA sequence. More base unstacking was detected for DNA substrates with an A-T base pair at the primer terminus compared to C-G or G-C base pairs. Since proofreading is also increased by A-T base pairs compared to G-C base pairs at the primer terminus, we propose that base unstacking may provide an opportunity for the DNA polymerase to reexamine the primer terminus.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».