The Region between Transmembrane Domains 1 and 2 of the Reduced Folate Carrier Forms Part of the Substrate-binding Pocket
Notice bibliographique
Résumé
A functional cysteine-less form of the hamster reduced folate carrier protein was generated by alanine replacement of the 14 cysteine residues. The predicted 12-transmembrane topology was examined by replacing selected amino acids, predicted to be exposed to the extracellular or cytosolic environments, with cysteines. The location of these cysteines was defined by their accessibility to biotin maleimide in the presence or absence of specific blocking agents. Amino acids predicted to be exposed to the extracellular environment (S46C, S179C, L300C, Y355C, and K430C) could be labeled with biotin maleimide; this modification could be blocked by prior treatment with nonpermeable reagents. Amino acids predicted to be within the cytosol (S152C, Cys224, and L475C) could be labeled only after streptolysin O permeabilization. In addition, the cysteine-less reduced folate carrier was exploited to evaluate a potential substrate-binding domain as suggested by previous studies. Nineteen cysteine replacements were generated between residues 39 and 75, a region located between the first and second transmembrane segments. From the biotinylation of these sites and the ability of various reagents to block this labeling, it appears that L41C, E45C, S46C, T49C, I66C, and L70C are exposed to the extracellular environment, whereas Q54C, Q61C, and T63C are slightly less accessible. Cysteines 39, 42, 44, 47, 51, and 73 were inefficiently biotinylated, suggesting that these sites are located in the membrane or within a tightly folded domain of the protein. Furthermore, biotinylation of cysteines 41, 46, 49, 70, and 71 could be prevented by prior treatment with either methotrexate or folinic acid, indicating that these sites form part of a substrate-binding pocket.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».