Pluripotentiality and Conditional Transgene Regulation in Human Embryonic Stem Cells Expressing Insulated Tetracycline-ON Transactivator
Notice bibliographique
Résumé
Conditional manipulation of gene expression by using tetracycline (TET)-ON based approaches has proven invaluable to study fundamental aspects of biology; however, the functionality of these systems in human embryonic stem cells (hESC) has not been established. Given the sensitivity of these cells to both genetic manipulation and variations of culture conditions, constitutive expression of TET transactivators might not only be toxic for hESC but might also impair their ability to self-renew or differentiate into multiple tissues. Therefore, the effect of these transactivators on the biology and pluripotentiality of hESC must first be evaluated before broad use of TET-ON methodologies is applied in these cells. Improved insulated lentivectors that display stable transgene expression and minimal insertional transactivation have been described for hESC. By using insulated lentivectors that allow simultaneous expression of TET components and fluorescent reporters, here we demonstrate that hESC constitutively expressing the TET-ON transactivator rtTA2SM2 can be derived and expanded in culture while retaining inducible transgene expression and pluripotentiality, including marker expression, a normal karyotype, and the ability to generate multiple tissues of different germ layer origin in teratomas. We also show that these cells retain the ability to control the expression of a stable integrated transgene in a doxycycline-dependent manner, which demonstrates that an insulated TET-ON lentiviral system is functional in hESC. Together, our results indicate that improved TET regulators like rtTA2SM2 in combination with insulated lentiviral-based systems offer alternative strategies for conditional gene expression in hESC. Disclosure of potential conflicts of interest is found at the end of this article.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».