Validation of TaqMan® SNP genotyping specificity for rs12979860 of IL-28B: Modeling primer specificity in vitro
Notice bibliographique
Résumé
Members of the type III interferon gene family arose by gene duplication events and have retained a high percent identity both in their coding and non-coding regions. In this study, the specificity of a widely used TaqMan(®) SNP genotyping assay for rs12979860 is validated. The 66 bp template for SNP genotyping has only 3 bp at one 5' end that vary between IL-28B and IL-28A; excluding the rs12979860 SNP itself. Conflicting annealing temperatures were found for the mismatched 19 bp primer to IL-28B and IL-28A with in silico melting temperature algorithms, or with in vitro dissociation curves. In order to prove specificity for IL-28B, an in vitro competition assay was setup with genomic DNA and synthetic oligonucleotides. When genomic DNA, containing equimolar concentrations of rs12979860 and the homologous region of IL-28A are present, no off-target amplification was observed. This SNP genotyping assay is therefore specific for rs12979860 and all previously reported results are valid. Finally, using a completely synthetic in vitro competition assay it was possible to calculate the amount of off-target template that will produce 1/2 the maximum on-target (VIC) fluorescent signal, a value that is between a C/C genotype and a T/T genotype. This value is defined in the manuscript as the half maximum positive value, KHPV, and in the present assay KHPV is 15.75±0.0721, represented as the relative fold increase in the amount of IL-28A over rs12979860. This method will be of interest to those performing genotyping on highly conserved gene families.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,004 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».