Engineering of a Chimeric RB69 DNA Polymerase Sensitive to Drugs Targeting the Cytomegalovirus Enzyme
Notice bibliographique
Résumé
Detailed structural and biochemical studies with the human cytomegalovirus (HCMV UL54) DNA polymerase are hampered by difficulties to obtain this enzyme in large quantities. The crystal structure of the related RB69 DNA polymerase (gp43) is often used as a model system to explain mechanisms of inhibition of DNA synthesis and drug resistance. However, here we demonstrate that gp43 is approximately 400-fold less sensitive to the pyrophosphate analog foscarnet, when compared with UL54. The RB69 enzyme is also able to discriminate against the nucleotide analog inhibitor acyclovir. In contrast, the HCMV polymerase is able to incorporate this compound with similar efficiency as observed with its natural counterpart. In an attempt to identify major determinants for drug activity, we replaced critical regions of the nucleotide-binding site of gp43 with equivalent regions of the HCMV enzyme. We show that chimeric gp43-UL54 enzymes that contain residues of helix N and helix P of UL54 are resensitized against foscarnet and acyclovir. Changing a region of three amino acids of helix N showed the strongest effects, and changes of two segments of three amino acids in helix P further contributed to the reversal of the phenotype. The engineered chimeric enzyme can be produced in large quantities and may therefore be a valuable surrogate system in drug development efforts. This system may likewise be used for detailed structural and biochemical studies on mechanisms associated with drug action and resistance.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».