FRET Analysis Indicates That the Two ATPase Active Sites of the P-Glycoprotein Multidrug Transporter Are Closely Associated
Notice bibliographique
Résumé
Members of the ABC superfamily carry out the transport of various molecules and ions across cellular membranes, powered by ATP hydrolysis. Substantial evidence indicates that the two catalytic sites of the nucleotide binding domains function in a highly cooperative, alternating sites mode, which suggests the possibility that they interact with each other physically. In this study, fluorescence energy transfer experiments were used to estimate the distance between two fluors, each covalently linked to a highly conserved Cys residue (Cys428 and Cys1071) within the Walker A motif of the catalytic site. The vanadate.ADP.Mg(2+) complex was trapped in one catalytic site of membrane-bound or highly purified P-glycoprotein, and the other site was labeled with MIANS [2-(4'-maleimidylanilino)naphthalene-6-sulfonic acid]. Following loss of the trapped vanadate complex, the newly vacant site was then labeled with NBD-Cl (7-chloro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole). The fluorescence properties of the singly labeled P-glycoproteins showed that no energy transfer occurred between MIANS (the donor) and NBD (the acceptor) when they were simply mixed together. On the other hand, the fluorescence emission of the MIANS group in doubly labeled P-glycoprotein was highly quenched as a result of energy transfer to NBD, leading to an estimate of a donor-acceptor separation distance of approximately 16 A for P-glycoprotein labeled in the native plasma membrane and approximately 22 A for P-glycoprotein labeled in detergent solution. The separation of the two fluorophores is compatible with the recently reported crystal structure of the Rad50cd dimer, but not with that of the HisP dimer. These results suggest that the two catalytic sites of the P-glycoprotein nucleotide binding domains are relatively close together, which would facilitate cooperation between them during the catalytic cycle.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».