N-Terminal Insertion and C-Terminal Ankyrin-Like Repeats of α-Latrotoxin Are Critical for Ca<sup>2</sup>+-Dependent Exocytosis
Notice bibliographique
Résumé
Alpha-latrotoxin, a potent stimulator of exocytosis from neurons and neuroendocrine cells, has been studied intensively, but the mechanisms of its actions are poorly understood. Here, we developed a new method to generate active recombinant alpha-latrotoxin and conducted a structure/function analysis of the toxin in stimulating Ca2+-dependent exocytosis. alpha-Latrotoxin consists of a conserved N-terminal domain and C-terminal ankyrin-like repeats. After cleavage of an N-terminally fused purification tag of glutathione S-transferase (GST), the recombinant toxin strongly stimulated exocytosis, whereas the GST-fused toxin was much less potent. The GST-fused toxin bound to the receptors [neurexin 1alpha; CL1 (CIRL/latrophilin 1)] as efficiently as did the GST-cleaved toxin but was much less effective in inserting into the plasma membrane and inducing cation conductance. The toxin with deletion of the last two ankyrin-like repeats still bound the receptors but could neither stimulate exocytosis nor induce cation conductance efficiently. The abilities of the mutated toxins to stimulate exocytosis correlated well with their abilities to induce cation conductance, but not their binding to the receptors. Our results indicate that (1) C-terminal ankyrin-like repeats and a free (unfused) N terminus are both required for the toxin to form pores, which is essential for Ca2+-dependent exocytosis, and (2) receptor binding alone is not sufficient to stimulate Ca2+-dependent exocytosis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».