Engineering Soluble Monomeric Streptavidin with Reversible Biotin Binding Capability
Notice bibliographique
Résumé
Monomeric streptavidin with reversible biotin binding capability has many potential applications. Because a complete biotin binding site in each streptavidin subunit requires the contribution of tryptophan 120 from a neighboring subunit, monomerization of the natural tetrameric streptavidin can generate streptavidin with reduced biotin binding affinity. Three residues, valine 55, threonine 76, and valine 125, were changed to either arginine or threonine to create electrostatic repulsion and steric hindrance at the interfaces. The double mutation (T76R,V125R) was highly effective to monomerize streptavidin. Because interfacial hydrophobic residues are exposed to solvent once tetrameric streptavidin is converted to the monomeric state, a quadruple mutein (T76R,V125R,V55T,L109T) was developed. The first two mutations are for monomerization, whereas the last two mutations aim to improve hydrophilicity at the interface to minimize aggregation. Monomerization was confirmed by four different approaches including gel filtration, dynamic light scattering, sensitivity to proteinase K, and chemical cross-linking. The quadruple mutein remained in the monomeric state at a concentration greater than 2 mg/ml. Its kinetic parameters for interaction with biotin suggest excellent reversible biotin binding capability, which enables the mutein to be easily purified on the biotin-agarose matrix. Another mutein (D61A,W120K) was developed based on two mutations that have been shown to be effective in monomerizing avidin. This streptavidin mutein was oligomeric in nature. This illustrates the importance in selecting the appropriate residues and approaches for effective monomerization of streptavidin.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».