86 EFFECT OF CRYOPROTECTANT EXPOSURE, VITRIFICATION, AND WARMING TIME OF BOVINE CUMULUS OOCYTE COMPLEXES ON IN VITRO FERTILIZATION AND EMBRYONIC DEVELOPMENT
Notice bibliographique
Résumé
Despite the importance of cryoprotectants for avoiding ice crystal formation, the high concentrations required for vitrification may be toxic to bovine oocytes. During warming (thawing), the removal of permeating cryoprotectants from cells can lead to osmotic injury, and the most appropriate time interval for warming and cryoprotectant removal from vitrified oocytes is currently uncertain. The present study aimed to evaluate the effect of cryoprotectant exposure, vitrification, and warming time of bovine cumulus oocyte complexes (COC) on fertilization and ability to develop as embryos in vitro. Follicles <8 mm in diameter were aspirated from slaughterhouse-derived bovine ovaries. Cumulus oocyte complexes with =3 layers of cumulus cells and a uniform cytoplasm were selected, washed 3 times in Dulbecco’s PBS + 5% newborn calf serum (CS), and randomly divided into 4 groups: 1) control group: no treatment; 2) VS1 group: COC were exposed to vitrification solution 1 [VS1: 7.5% ethylene glycol (EG) and 7.5% dimethyl sulfoxide (DMSO) in TCM-199 + 20% CS] for 5 min; 3) VS1+VS2 group: COC were exposed to VS1 for 5 min followed by vitrification solution 2 (VS2: 15% EG, 15% DMSO, and 0.5 M sucrose in TCM-199 + 20% CS) for 30 s; and 4) vitrified group: COC were exposed to VS1 and VS2, and then vitrified in liquid nitrogen using cryotops. The COC in VS1, VS1+VS2, and vitrified groups were exposed to a warming solution (0.5 M sucrose in TCM-199) for 1 or 5 min. The COC from all groups were in vitro matured (IVM) for 22 h in TCM-199 containing 5% CS, 5 µg mL–1 LH, 0.5 µg mL–1 FSH, and 0.05 µg mL–1 gentamicin at 38.5°C, 5% CO2, and high humidity, incubated with frozen–thawed sperm in Brackett-Oliphant capacitating medium for 18 h, and the presumptive zygotes were cultured in Charles Rosenkrans 1 amino acids (CR1aa) + 5% CS for 9 days. Data were analysed using Proc Glimmix in SAS® 9.2 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Cleavage and blastocyst rates in the vitrified group (25 and 2%, respectively) were significantly lower (P < 0.0001) than in control (75 and 27%), VS1 (68 and 19%), or VS1+VS2 (63 and 22%) groups. Cleavage and blastocyst rates did not differ among non-vitrified groups (P > 0.05). In VS1, VS1+VS2, and vitrified groups, warming time had no effect on cleavage or blastocyst rates (P > 0.05). In conclusion, although cryoprotectant exposure and warming times had no apparent adverse effect, vitrification of bovine COC drastically reduced cleavage and blastocyst rates. Further studies are required to understand how vitrification of bovine COC affects subsequent fertilization and embryo development. This study was supported by the Canadian Animal Genetic Resources Program, Agriculture and Agri-Food Canada.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».