Impact of Glycosylation on Saccharomyces cerevisiae Endopolygalacturonase PGU1 Activity and Stability
Notice bibliographique
Résumé
Endopolygalacturonases are among the best selling enzymes for a number of commercial applications such as food processing. For such enzymes, a potentially important component of production cost is glycosylation. This important modification of endopolygalacturonase has been detected for a number of species, but its real importance has not been thoroughly studied. Here we investigated endopolygalacturonase PGU1 from Saccharomyces cerevisiae CECT 1389 produced in S. cerevisiae INVSc 1. Combinatorial mutagenesis of recombinant S. cerevesiae PGU1 putative glycosylation sites was performed, where asparagines 318 and 330 were replaced with either aspartic acid or glutamine. Electrophoretic analysis of the different recombinant enzymes studied here demonstrates that the putative sites 318 and 330 are indeed glycosylated when produced in S. cerevesiae INVSc 1. The optimal activity of these enzymes was detected at pH 4.5 and 55-60 ºC. As for stability, all enzymes studied were less than 50% active after an incubation of two hours at 50 ºC and at pH between 4.5 and 6.0. Glycosylation did not provide any significant stabilisation of PGU1, but the replacement of Asn 330 with Gln had a deleterious effect on stability. The secondary structure spectra are characteristics of proteins mostly composed of beta sheets. The Tm values measured for PGU1, PGU1 deglycosylated with endo H, and three mutants ranged from 53 to 55.4ºC, indicating that glycosylation had no impact on PGU1 conformation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».