Trafficking of immature ΔF508-CFTR to the plasma membrane and its detection by biotinylation
Notice bibliographique
Résumé
Recent studies suggest that immature, core-glycosylated DeltaF508-CFTR [the predominant mutant form of the CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)] can reach the plasma membrane under some conditions. In the present study we investigated this possibility since it has implications for understanding how therapeutics rescue the trafficking of mutant CFTR and perhaps other misfolded proteins. Core-glycosylated CFTR was labelled and pulled down on streptavidin beads after exposure to sulfo-NHS-SS-biotin [biotin attached to a reactive NHS (N-hydroxysuccinimide) ester with a disulfide spacer; molecular mass=606.7 Da]; however, intracellular proteins were also detected in the precipitates. When the R domain of CFTR was expressed in the cytosol of BHK (baby-hamster kidney) cells as a soluble polypeptide it was also labelled after surface biotinylation and pulled down on streptavidin beads. Intracellular biotinylation was reduced when cells were treated with sulfo-NHS-LC-biotin (biotin attached to a reactive NHS ester with an aminocaproic acid spacer) or sulfo-NHS-PEO(12)-biotin [biotin attached to a reactive NHS ester with a poly(ethylene glycol) spacer], but the reduction could be explained by the lower reactivity of these reagents. The R domain was detected on Western blots after loading <0.25% of the pulldown sample ( approximately 0.01% of total lysate protein), a fraction that could be ascribed to cells that were permeable to ethidium homodimer-1 (molecular mass=856.8 Da) and propidium iodide (molecular mass=668.6 Da). When BHK cells were incubated at 29 degrees C to rescue DeltaF508-CFTR trafficking, and then biotinylated and sorted to remove permeable cells, labelling of core-glycosylated DeltaF508-CFTR was no longer detected although a weak signal was still observed using CFBE (cystic fibrosis bronchial epithelial) cells. These results suggest that there is weak surface expression of immature DeltaF508-CFTR on airway epithelial cells and demonstrate the need to remove permeable cells when studying CFTR glycoforms by surface biotinylation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».