Circular permutated red fluorescent proteins and calcium ion indicators based on mCherry
Notice bibliographique
Résumé
Red fluorescent indicators for calcium ion (Ca(2+)) are preferable, relative to blue-shifted alternatives, for biological imaging applications due to the lower phototoxicity, lower autofluorescent background and deeper tissue penetration associated with longer wavelength light. Accordingly, we undertook the development of a genetically encoded Ca(2+) indicator based on the popular and widely utilized Discosoma-derived red fluorescent protein, mCherry. Starting from a promising but dimly fluorescent circular permutated variant of mCherry, we first engineered a 13-fold brighter variant (cp196V1.2) through directed evolution. This bright cp196V1.2 was then used as the scaffold for creation of eight distinct libraries of potential Ca(2+) indicators via permutation at different sites within the 7th and 10th β-strands, and fusion of calmodulin and M13 to the new termini. Screening of these libraries led to the conclusion that, consistent with previous investigations of homologous fluorescent proteins, the 146-145 site in β-strand 7 is the most promising permutation site for construction of useful Ca(2+) indicators. Further rounds of directed evolution ultimately led to an indicator that exhibits a 250% change in intrinsic brightness in response to Ca(2+) and an exceptionally high affinity (Kd = 6 nM) for Ca(2+).
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».