Controllable protein cleavages through intein fragment complementation
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Intein-based protein cleavages, if carried out in a controllable way, can be useful tools of recombinant protein purification, ligation, and cyclization. However, existing methods using contiguous inteins were often complicated by spontaneous cleavages, which could severely reduce the yield of the desired protein product. Here we demonstrate a new method of controllable cleavages without any spontaneous cleavage, using an artificial S1 split-intein consisting of an 11-aa N-intein (I(N)) and a 144-aa C-intein (I(C)). In a C-cleavage design, the I(C) sequence was embedded in a recombinant precursor protein, and the small I(N) was used as a synthetic peptide to trigger a cleavage at the C-terminus of I(C). In an N-cleavage design, the short I(N) sequence was embedded in a recombinant precursor protein, and the separately produced I(C) protein was used to catalyze a cleavage at the N-terminus of I(N). These N- and C-cleavages showed >95% efficiency, and both successfully avoided any spontaneous cleavage during expression and purification of the precursor proteins. The N-cleavage design also revealed an unexpected and interesting structural flexibility of the I(C) protein. These findings significantly expand the effectiveness of intein-based protein cleavages, and they also reveal important insights of intein structural flexibility and fragment complementation.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle