Interconversion of a pair of active-site residues in <i>Escherichia coli</i> cystathionine γ-synthase, <i>E. coli</i> cystathionine β-lyase, and <i>Saccharomyces cerevisiae</i> cystathionine γ-lyase and development of tools for the investigation of their mechanisms and reaction specificity
Notice bibliographique
Résumé
Cystathionine gamma-synthase (CGS) and cystathionine beta-lyase (CBL), which comprise the transsulfuration pathway of bacteria and plants, and cystathionine gamma-lyase (CGL), the second enzyme of the fungal and animal reverse transsulfuration pathway, share approximately 30% sequence identity and are almost indistinguishable in overall structure. One difference between the active site of Escherichia coli CBL and those of E. coli CGS and Saccharomyces cerevisiae CGL is the replacement of a pair of aromatic residues, F55 and Y338, of the former by acidic residues in CGS (D45 and E325) and CGL (E48 and E333). A series of interconverting, site-directed mutants of these 2 residues was constructed in CBL (F55D, Y338E, F55D/Y338E), CGS (D45F, E325Y and D45F/E325Y) and CGL (E48A,D and E333A,D,Y) to probe the role of these residues as determinants of reaction specificity. Mutation of either position results in a reduction in catalytic efficiency, as exemplified by the 160-fold reduction in the kcat/KmL-Cys of eCGS-D45F and the 2850- and 30-fold reductions in the kcat/KmL-Cth of the eCBL-Y338E and the yCGL-E333A,Y mutants, respectively. However, the in vivo reaction specificity of the mutants was not altered, compared with the corresponding wild-type enzymes. The DeltametB and DeltametC strains, the optimized CBL and CGL assay conditions, and the efficient expression and affinity purification systems described provide the necessary tools to enable the continued exploration of the determinants of reaction specificity in the enzymes of the transsulfuration pathways.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».