Identification of a Disulfide Bridge Linking the Fourth and the Seventh Extracellular Loops of the Na+/Glucose Cotransporter
Notice bibliographique
Résumé
The Na+/glucose cotransporter (SGLT1) is an archetype for the SLC5 family, which is comprised of Na+-coupled transporters for sugars, myo-inositol, choline, and organic anions. Application of the reducing agent dithriothreitol (DTT, 10 mM) to oocytes expressing human SGLT1 affects the protein's presteady-state currents. Integration of these currents at different membrane potentials (Vm) produces a Q-V curve, whose form was shifted by +25 mV due to DTT. The role of the 15 endogenous cysteine residues was investigated by expressing SGLT1 constructs, each bearing a single mutation for an individual cysteine, in Xenopus oocytes, using two-microelectrode voltage-clamp electrophysiology and fluorescent labeling. 12 of the 15 mutants were functional and could be separated into three distinct groups based on the effect of the mutation on the Q-V curve: four mutants did not perturb the transferred charge, six mutants shifted the Q-V curve towards negative potentials, and two mutants (C255A and C511A) produced a shift in the positive direction that was identical to the shift produced by DTT on the wild-type (wt) SGLT1. The double mutant C(255,511)A confirms that the effects of each single mutant on the Q-V curve were not additive. With respect to wt SGLT1, the apparent affinities for alpha-methylglucose (alphaMG) were increased in a similar manner for the single mutants C255A and C511A, the double mutant C(255,511)A as well as for wt SGLT1 treated with DTT. When exposed to a maleimide-based fluorescent probe, wt SGLT1 was not significantly labeled but mutants C255A and C511A could be clearly labeled, indicating an accessible cysteine residue. These residues are presumed to be C511 and C255, respectively, as the double mutant C(255,511)A could not be labeled. These results strongly support the hypothesis that C255 and C511 form a disulfide bridge in human SGLT1 and that this disulfide bridge is involved in the conformational change of the free carrier.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».