Purification and Characterization of Brochocin A and Brochocin B(10-43), a Functional Fragment Generated by Heterologous Expression in <i>Carnobacterium piscicola</i>
Notice bibliographique
Résumé
Brochothrix campestris ATCC 43754 produces a heat-stable, two-component, nonlantibiotic, class IIb bacteriocin, brochocin C (BrcC), that is active against a broad range of gram-positive bacteria, including spores of Clostridium botulinum. An improved purification method was developed for BrcC, in which n-butanol and chloroform extraction are used. Mass spectral characterization of the two components, brochocin A (BrcA) and brochocin B (BrcB), showed that both components are excreted into the medium by B. campestris as mature peptides consisting of 59 and 43 amino acids, respectively. Separate expression clones of BrcA and BrcB were constructed previously in Carnobacterium piscicola LV17C, but the products were not chemically characterized. Purification by the new protocol showed that BrcA is expressed as the mature 59-amino-acid peptide but that BrcB is produced by C. piscicola as a fragment, BrcB(10-43), which is cleaved at an internal Gly-Gly site. This fragment is not antimicrobial by itself, but in combination with BrcA it displays the full activity of the BrcC complex. Circular dichroism measurements revealed a high beta-sheet content in the secondary structure of both BrcA and BrcB(10-43), as well as in a 1:1 BrcA-BrcB(10-43) mixture. Separate expression clones of brcA and brcB were also constructed in Escherichia coli, but these clones only produced multiple fragments of the desired peptides with little or no activity.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».