Retrovector Encoding a Green Fluorescent Protein–Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase Fusion Protein Serves as a Versatile Suicide/Reporter for Cell and Gene Therapy Applications
Notice bibliographique
Résumé
Expression vectors encoding herpes simplex virus thymidine kinase (HSVTK) have been extensively used in cell and gene therapy applications either as anticancer "suicide" or as "self-destruct" transgenes in adoptive immunotherapy applications. In both gene therapy applications, reliable detection of HSVTK transgene expression is required in genetically engineered cells. Direct fluorescent labeling of the HSVTK protein may be the remedy. We designed a retrovector encoding a chimeric GFP-HSVTK fusion protein that can serve as a bifunctional suicide and reporter transgene. The fusion gene was incorporated in a VSV G-pseudotyped retrovector (vGFPTKfus) and high-titer stable retroviral producer was generated ( approximately 3 x 10(6) retroparticles/ml). Tumor cell lines transduced at an MOI of 8 for 3 days led to >90% gene transfer efficiency. Southern blot analysis confirmed that unrearranged proviral genomes integrated in chromosomal DNA. Protein extract immunoblot with HSVTK antisera revealed the presence of a 70-kDa protein consistent with the predicted size of an HSVTK-GFP fusion protein. Fluorescence microscopy and FACS analysis revealed that GFPTKfus-mediated fluorescence was nuclear localized and was 30-fold greater than that observed in a bicistronic HSVTK-GFP vector. Growth of cell lines expressing vGFPTKfus was significantly suppressed in the presence of ganciclovir. The DA3 mouse mammary carcinoma cell line was transduced with vGFPTKfus and implanted in syngeneic BALB/c mice. Preestablished tumors completely regressed in seven of nine mice treated with ganciclovir. Normal human peripheral blood T lymphocytes were transduced with vGFPTKfus and nucleus-restricted green fluorescence was observed. Sorting of green fluorescent lymphocytes allowed for selection of engineered cells. In conclusion, we demonstrate the utility of vGFPTKfus as a suicide/reporter transgene in tumor cells in vitro and in vivo. Furthermore, its potential use as an analytical and therapeutic tool targeting human T lymphocytes is shown.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».