Characterization of function and activity of domains A, B and C of xylanase C from Fibrobacter succinogenes S85
Notice bibliographique
Résumé
Xylanase C from the ruminant bacterium Fibrobacter succinogenes is comprised of two catalytic domains, A and B, and a third domain, C, of unknown function. The DNA coding for domains A and B of xylanase C were separately cloned and expressed in Escherichia coli as fusion proteins with glutathione-S:-transferase. The fusion proteins were isolated by affinity chromatography on glutathione-Sepharose 4B, cleaved with thrombin and the released xylanase C catalytic domains A and B were purified to apparent homogeneity by anion-exchange chromatography on Mono Q. Electrospray mass spectrometry provided a molecular mass of 27 818 Da (expected, 27 820 Da) for domain B. The pH and temperature optima for activity of domain B on oat spelt xylan were 5.0 and 52 degrees C, respectively. A kinetic analysis of the activity of the catalytic domain A on oat spelt xylan, birch wood xylan and xylooligomers at pH 6.5 and 37 degrees C provided data significantly different to those obtained previously with a protease-derived form of the enzyme [Zhu et al. (1994) J. Bacteriol. 176, 3885-3894]. The isolated domain A was more active on barley-glucan than the protease-derived form and its affinity for birch wood xylan was enhanced resulting in greater overall catalytic efficiency as reflected by k(cat)/K:(M) values. Likewise, significant differences in the Michaelis-Menten parameters K:(M), k(cat) and k(cat)/K:(M) were obtained with domain B compared with values previously reported with this domain attached to domain C. In general, the presence of domain C appeared to decrease the overall efficiency of domain B 7- and 36-fold with birch wood xylan and xylopentaose as substrates, respectively, as reflected by values of k(cat)/K:(M). The removal of domain C also affected the mode of action of domain B such that it more closely resembled that of catalytic domain A. However, no change in either pH and temperature optima or stability were found with domain B compared with the combined domains B and C. The function of domain C remains unknown, but hydrophobic cluster analysis indicated that it may belong to a class of dockerin domains involved in the protein-protein interactions of cellulolytic and xylanolytic complexes.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».