Proton-Dependent Gating and Proton Uptake by Wzx Support O-Antigen-Subunit Antiport Across the Bacterial Inner Membrane
Notice bibliographique
Résumé
Wzx flippases are crucial for bacterial cell surface polysaccharide assembly as they transport undecaprenyl pyrophosphate-linked sugar repeat units from the cytoplasmic to the periplasmic leaflets of the inner membrane (IM) for final assembly. Our recently reported three-dimensional (3D) model structure of Wzx from Pseudomonas aeruginosa PAO1 (WzxPa) displayed a cationic internal vestibule and functionally essential acidic amino acids within transmembrane segment bundles. Herein, we examined the intrinsic transport function of WzxPa following its purification and reconstitution in phospholipid liposomes. WzxPa was capable of mediating anion flux, consistent with its cationic interior. This flux was electrogenic and modified by extraliposomal pH. Mutation of the above-mentioned acidic residues (E61, D269, and D359) reduced proton (H(+))-modified anion flux, showing the role of these amino acid side chains in H(+)-dependent transport. Wzx also mediated acidification of the proteoliposome interior in the presence of an outward anion gradient. These results indicate H(+)-dependent gating and H(+) uptake by WzxPa and allow for the first H(+)-dependent antiport mechanism to be proposed for lipid-linked oligosaccharide translocation across the bacterial IM. IMPORTANCE Many bacterial cell surface polysaccharides that are important for survival and virulence are synthesized at the periplasmic leaflet of the inner membrane (IM) using precursors produced in the cytoplasm. Wzx flippases are responsible for translocation of lipid-linked sugar repeat units across the IM and had been previously suggested to simply facilitate passive substrate diffusion. Through our characterization of purified Wzx in a reconstitution system described herein, we have observed protein-dependent intrinsic transport producing a change in the electrical potential of the system, with H(+) identified as the coupling ion. These results provide the first evidence for coupled (i.e., secondary active) transport by these proteins and, in conjunction with structural data, allow for an antiport mechanism to be proposed for the directed transport of lipid-linked sugar substrates across the IM. These findings bring our understanding of lipid-linked polysaccharide transporter proteins more in line with the efflux pumps to which they are evolutionarily related.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».