Expression and translocation of fluorescent-tagged p21-activated kinase-binding domain and PH domain of protein kinase B during murine neutrophil chemotaxis
Notice bibliographique
Résumé
Neutrophils are key cells of the innate immune system; they are terminally differentiated and therefore difficult to genetically manipulate and study in vitro. In the present study, we describe a protocol to transiently express two fluorescent markers, the PH domain of protein kinase B fused to red fluorescent protein and the p21-activated kinase-binding domain fused to a yellow fluorescent protein, in primary neutrophils. Using this approach, we are able to achieve a transfection efficiency of approximately 30%. The expression of the transfected probes occurred within 2 h and allowed for real-time monitoring of intermediates in key neutrophil activation pathways at the leading edge of migrating cells. We describe here a transfection protocol for primary neutrophils, which preserves fMLP-mediated cell polarization and cytoskeleton reorganization with simultaneous accumulation of PI-3K products and active Rac at the leading edge. The visualization and analysis of transfected fluorescent markers in primary neutrophils are a powerful technique to monitor chemotaxis signaling pathways in real time.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».