Development of Homogeneous Nonradioactive Methyltransferase and Demethylase Assays Targeting Histone H3 Lysine 4
Notice bibliographique
Résumé
Histone posttranslational modifications are among the epigenetic mechanisms that modulate chromatin structure and gene transcription. Histone methylation and demethylation are dynamic processes controlled respectively by histone methyltransferases (HMTs) and demethylases (HDMs). Several HMTs and HDMs have been implicated in cancer, inflammation, and diabetes, making them attractive targets for drug therapy. Hence, the discovery of small-molecule modulators for these two enzyme classes has drawn significant attention from the pharmaceutical industry. Herein, the authors describe the development and optimization of homogeneous LANCE Ultra and AlphaLISA antibody-based assays for measuring the catalytic activity of two epigenetic enzymes acting on lysine 4 of histone H3: SET7/9 methyltransferase and LSD1 demethylase. Both the SET7/9 and LSD1 assays were designed as signal-increase assays using biotinylated peptides derived from the N-terminus of histone H3. In addition, the SET7/9 assay was demonstrated using full-length histone H3 protein as substrate in the AlphaLISA format. Optimized assays in 384-well plates are robust (Z' factors ≥0.7) and sensitive, requiring only nanomolar concentrations of enzyme and substrate. All assays allowed profiling of known SET7/9 and LSD1 inhibitors. The results demonstrate that the optimized LANCE Ultra and AlphaLISA assay formats provide a relevant biochemical screening approach toward the identification of small-molecule inhibitors of HMTs and HDMs that could lead to novel epigenetic therapies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».